La activación de la integrina Beta1 afecta la sensibilidad de la línea celular leucémica a las célul

El papel de las integrinas beta1 (CD29) en la conjugación de célula diana natural (NK) y citotoxicidad no se ha establecido claramente. La ligación de integrinas beta1 en células NK puede modular la capacidad lítica tanto de manera positiva como negativa; sin embargo, la contribución de las integrinas beta1 presentes en las células diana aún no se ha evaluado. En este estudio científico, se analizó el efecto de las integrinas beta1 (CD29) expresadas por posibles células tumorales diana en conjugación y citotoxicidad.

Análisis cualitativo de colocalización de GM1 (verde) y MHC-I (rojo) en la membrana de las células NKL conjugadas a células K562 mediante microscopía confocal. Las células NKL se tiñen rojas por inmunofluorescencia tratando con un anticuerpo anti-MHC-I (W6/32) y un segundo anticuerpo de cabra anti-ratón-Alexa Fluor 568. A continuación se adhieren a un cubreobjetos, se fijan con formol y se tiñen de verde con CTXB-Alexa Fluor-488.

Usando ensayos de unión por citometría de flujo normalizada, demostramos que el pretratamiento de líneas celulares diana de leucemia humana MOLT-4, K562, U-937 y HL-60 con anticuerpos monoclonales anti-beta1 seleccionados (mAb) aumentó la conjugación a la línea celular NK humana, así como a las células NK purificadas. Solo los mAb que reconocen los residuos 207-218 de la subunidad beta1 y funcionalmente implicados en la inducción de la adhesión homotípica (epítope funcional A1) aumentaron la conjugación de todas las células diana. Además, el mAb para moléculas de adhesión diferentes de beta1 pero también inductores de la adhesión homotípica de las células diana, es decir, CD43 y CD50 (ICAM-3), no lograron aumentar la conjugación con las células NKL.

Porcentajes de citotoxicidad de células diana U-937 pretratadas con anticuerpos anti-b1 y anti-HLA de clase I y enfrentadas a células NKL. Los datos están expresados como media ± SD de 6 experimentos. Las diferencias significativas se obtuvieron mediante t-Student : * p< 0.05; ** p< 0.01; *** p < 0.001.

Los ensayos de citotoxicidad demostraron que la lisis de células diana sensibles a NK (MOLT-4) también aumentó después del pretratamiento con el mAb A1 de epítopo anti-beta1. De manera importante, el pretratamiento de las células diana resistentes a NK (U-937 y HL-60) con mAb anti-beta1 no fue capaz de superar los mecanismos inhibidores citotóxicos controlados por las moléculas HLA clase I. Sin embargo, el enmascaramiento simultáneo de las moléculas de HLA de clase I con mAb y el pretratamiento con mAb anti-beta1 proporcionaron células resistentes a NK susceptibles a la lisis. El desencadenamiento de las células diana tumorales a través de las integrinas beta1 puede desempeñar un papel en la conjugación con las células NK así como en la coestimulación de la citotoxicidad mediada por células.

Porcentajes de conjugación en el sistema NKL/MOLT-4 mediante citometría de flujo después del tratamiento

Es decir, estos resultados ponen de manifiesto el papel modulador de la subunidad b1 de las integrinas VLA sobre la capacidad de conjugación y citotoxicidad en todos los sistemas efector/diana estudiados, excepto para aquellas células especialmente susceptibles a la lisis medidada por células NK, tales como las K562, que por ellos son consideradas dianas por excelencia en ensayos de actividad de la células NK

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